反向色譜柱在使用過(guò)程中可能遇到多種故障，以下是針對(duì)這些故障的解決方案：

　　一、壓力異常升高

　　1. 篩板堵塞

　　- 表現(xiàn)：柱壓顯著上升或波動(dòng)。

　　- 解決：卸下篩板，置于10%稀硝酸中超聲清洗10分鐘，純水沖洗后重新安裝。也可使用強(qiáng)溶劑反向沖洗。注意避免正向高壓沖擊。

　　2. 填料污染

　　- 表現(xiàn)：柱頭填料被強(qiáng)保留物質(zhì)覆蓋，導(dǎo)致柱效下降。

　　- 解決：擰開(kāi)柱接頭，挖出表層污染填料，替換為新填料并壓實(shí)。此方法可部分恢復(fù)柱效，但難以達(dá)到新柱水平。

　　3. 鹽結(jié)晶析出

　　- 表現(xiàn)：流動(dòng)相含高濃度有機(jī)溶劑時(shí)，緩沖鹽結(jié)晶堵塞流路。

　　- 解決：先用低濃度甲醇/水溶解鹽類，再切換至高濃度有機(jī)相沖洗。

　　二、分離效果下降

　　1. 峰形異常

　　- 拖尾/分叉：因柱頭塌陷或死體積增大，需補(bǔ)填同型號(hào)填料并壓平。若因金屬污染，改用高純度硅膠柱。

　　- 鬼峰：殘留污染物在高溫下流出，可通過(guò)升高終溫烘烤色譜柱去除。

　　2. 柱效降低

　　- 原因：固定相流失或硅膠溶解。

　　- 解決：優(yōu)化流動(dòng)相pH(建議2~9)，避免堿性條件加速鍵合相水解。

　　三、保留時(shí)間漂移

　　1. 平衡不足：更換流動(dòng)相后至少通入10~20倍柱體積平衡。

　　2. 疏水坍塌：C18柱長(zhǎng)期用水相運(yùn)行會(huì)導(dǎo)致孔隙收縮，需注入5%有機(jī)相恢復(fù)。

　　四、預(yù)防性維護(hù)策略

　　1. 規(guī)范操作流程

　　- 避免壓力驟變，開(kāi)關(guān)閥需緩慢。

　　- 流動(dòng)相切換需梯度過(guò)渡，禁止直接從有機(jī)相轉(zhuǎn)純水相。

　　2. 定期深度清洗

　　- 常規(guī)沖洗：依次用95%水-5%甲醇→純甲醇→異丙醇沖洗，每種溶劑至少10倍柱體積

　　- 頑固污染物：蛋白質(zhì)殘留選用DMSO，淀粉類用水洗脫。

　　3. 存儲(chǔ)條件優(yōu)化

　　- 長(zhǎng)期不用時(shí)，柱內(nèi)存滿甲醇或乙腈，擰緊接頭防止干燥[^2^]。禁止滯留緩沖液過(guò)夜。

　　反向色譜柱故障解決需結(jié)合物理沖洗、化學(xué)再生及操作規(guī)范。優(yōu)先排除非柱源性因素(如儀器堵塞)，再針對(duì)性處理色譜柱本身問(wèn)題。建立完整的維護(hù)日志，記錄每次沖洗條件、壓力變化及測(cè)試結(jié)果，可顯著延長(zhǎng)柱子使用壽命。